【操作步骤】
(1)所有试剂在使用前需在常温(25±3℃)平衡30 分钟或30 分钟以上时间。
(2)从铝箔袋中取出抗原包被板,以1×洗涤液300μL/孔洗板1 次,弃去洗涤液并拍干。将血清稀释板中稀释好的待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清分别加入到ELISA 板中,50μL/孔,其中阳性对照血清和阴性对照血清各加2 孔(孔1、孔2)。
(3)每孔加入 50μL 已稀释好的单克隆抗体。
(4)用封板膜封好反应板,振荡混匀5 分钟,37℃孵育30 分钟。
(5)用已稀释好的洗涤液洗板3 次,每次300μL。洗板后,弃掉孔内液体。在最后一次洗涤后,在纸上将板孔内残留液体拍干。在进行下一步操作之前避免反应板干燥。
(6)在EP 管中将羊抗鼠酶标抗体与羊抗鼠酶标抗体稀释液按1:99 充分混匀,如148.5μL 的羊抗鼠酶标抗体稀释液中加入1.5μL 的羊抗鼠酶标抗体,稀释后,每孔加入100μL。
(7)用封板膜封好反应板,37℃孵育30 分钟。
(8)重复步骤(5)。
(9)将底物液A 和B 按1:1(V/V)混合后,立即加入到ELISA 反应板中,100μL/孔。
(10)用封板膜封好反应板,25±3℃避光静置显色15 分钟。
(11)每孔加入50μL 终止液。
(12)反应终止后,15 分钟内用酶标仪测定 OD450nm。
(13)判定和计算结果。
(更详细资料请参照说明书)